第30章 睡3

    分类

    1 根据细胞种类：原代细胞培养， 传代细胞培养

    原代细胞：将动物各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用edta) 或机械方法处理，分散成单细胞，在合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。培养的细胞为正常的动物细胞，一般培养10代后不再增殖，死亡。

    传代细胞：传代培养是细胞培养常规保种方法之一，也是所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长，这一过程就叫传代。传代培养可获得大量供实验所需细胞。细胞传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细地无菌操作。培养的细胞为癌变或人为癌化的细胞，理论上可以无限增殖。癌化的方式有很多：进行癌基因突变，感染病毒，从癌症供体体内分离，物理或化学方法（如紫外，化学试剂）等。

    2 根据培养方式：贴壁细胞培养，半悬浮细胞培养，悬浮细胞培养

    主要区别

    培养基不同：植物细胞（固体培养基），动物细胞（液体培养基）。

    培养基的成分不同：动物细胞培养必须利用动物血清，植物组织培养则不需要，而需要加入植物生长素。

    产物不同：植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是只含同一种的细胞的一个细胞系（或者叫细胞群）。

    原理不同：植物组织培养的原理为植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理为细胞的增殖分化。

    过程不同：植物组织培养的过程为脱分化和再分化，动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养。

    （5）实验培养基母液的配制

    一、实验目的培养基配制前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素分别配制成比培养剂配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算的量吸取母液即可。通过本次实验，了解培养基母液的配制及保存的方法。

    二、实验安排分组进行，每组完成部分配制工作，共同完成一批母液的配制。

    三、试剂与器材1、试剂：各种激素，蒸馏水。 2、器材：不同感量天平、烧杯（1000，500，50ml）、量筒（1000，100，50ml）、容量瓶（1000，200，100，50ml）、细口瓶（1000，100，50ml）。

    四、操作方法1、大量元素母液的配制各成分按照表配方称量，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1l培养基取此液100ml。2、微量元素母液的配制按表1-2配方用感量为00001g的分析天平称量。配制培养基时，每配制1l培养基，取此液1ml。3、铁盐母液的配制 铁盐如果用柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。若是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。配制方法是按照表1-3配方称量，然后将feso4和na2edta分别用蒸馏水加热搅拌溶解，混合两种溶液继续煮沸，冷却后定溶至1000ml。配制培养基时，每配制1l培养基取此液10ml。4、有机附加成分母液的配制 按表1-4用量称量并分别溶解于蒸馏水中，然后定容至500ml，贮存在棕色无菌瓶中。配制培养基时，每配制1l培养基取此液5ml。5、激素的配制按表1-5用量称量，并先用相应的少量有机溶剂进行溶解，在用蒸馏水定容至50ml。贴好标签，写明配制的激素的浓度，贮存在冰箱中。

    五、关键步骤与注意事项

    1、ca2＋和so42－，po43-一起溶解后会产生沉淀，配制时一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、药品的称量及定容都要准确。